Mentelin übersiedelte wahrscheinlich Anfang der vierziger Jahre des 15. Jahrhunderts nach Straßburg, wo er als Bücherschreiber und Kalligraph tätig war, wovon die zweibändige Abschrift der "Vita Christi" des Ludolphus de Saxonia (1444) Zeugnis gibt. 1447 erwarb er die Straßburger Bürgerrechte und trat der Malerzunft bei. Um 1458/59 richtete er mit Unterstützung des Straßburger Bischofs Ruprecht und des Druckers Heinrich Eggestein, eines Schülers Gutenbergs, eine Druckerei ein. Der erste Druck seiner Offizin war eine zweibändige, 49zeilige lateinische Bibel (1460), der ein Exemplar der 42zeiligen Bibel Gutenbergs als Vorlage gedient hatte. Als letzter Druck der Mentelinschen Offizin ist das mittelhochdeutsche Epos "Parzival" (1477) des Wolfram von Eschenbach bezeugt. Er ging als ältester Inkunabeldrucker Straßburgs in die Geschichte ein.